Sơ đồ và thiết bị một phòng thí nghiệm nuôi cấy mô tế bào

Sơ đồ tổng quan như sau:

- Tùy thuộc vào cơ sở hạ tầng mà co thể bố trí các phòng khác nhau

- VD: có thể gộp các phòng như trong danh mục thiết bị để tiết kiệm diện tích

       Phòng rửa dụng cụ và cất nước

       Phòng hấp - sấy, kho thuỷ tinh sạch

       Phòng chuẩn bị môi trường, khử trùng mẫu

       Phòng nuôi sáng, nuôi tối (2 phòng riêng biệt)

       Phòng sinh hóa

Các thiết bị dụng cụ cần thiết cho một phòng nuôi cấy mô chuyên nghiệp đươc tổng kết dưới đây ( * chỉ những thiết bị không hoàn toàn cần phải có và có thể thay bằng các dụng cụ đơn giản hơn)

1. Phòng rửa dụng cụ và cất nước

Phòng rửa dụng cụ phải có bồn rửa lớn , có đường thoát nước riêng cho axit, có kệ để các thiết bị, có nguồn cung cấp ga, nước, điện và có thể không khí nén*, ống chân không *

- Xà phòng, axit HCl hoặc sulfuric.

- Máy rửa pipet*, các loại chổi cọ rửa.

- Bồn rửa dụng cụ

- Thùng đun nước nóng

- Máy sản xuất nước khử ion

- Máy cất nước 1 lần (8l/lần)

- Máy cất nước 2 lần

2. Phòng hấp – sấy, kho thuỷ tinh sạch

- Các giá kim loại để dựng các ống nghiệm khi hấp trong nồi hấp

- Nồi hấp Autoclave hoặc nồi áp suất: Nồi áp suất loại nhỏ (20-30 lít), Nồi áp suất loại lớn (70-100 lít)
- Tủ sấy 60 – 600oC(loại có dung tích lớn)

- Giấy nhôm hoặc hoặc hộp kim loại để tránh bị nhiễm trở lại sau khi đã khử

- Đồng hồ định giờ

3. Phòng chuẩn bị môi trường

- Tủ có chứa các loại hoá chất khác nhau
- Cân phân tích (chính xác đến 0,0001 g)
- Cân kỹ thuật (chính xác đến 0,01 g)
- pH kế
- Máy khuấy từ gia nhiệt

- Tủ lạnh 100-200 l

- Tủ lạnh sâu (-20 đến -800C)

- Lò vi sóng* hay bếp đun để đun nóng môi trường khi trộn với aga

- Máy rót môi trường

- Máy trộn khi pha lượng lớn môi trường*

- Các dụng cụ thuỷ tinh trong suốt

- Bông không thấm nước

- Các dung dịch mẹ (stock, solutions)

- Màng lọc Millipore và giá đơc chịu nhiệt hoặc các phễu lọc thuỷ tinh xốp số 5

- Các hoá chất diệt khuẩn để xử lý mô thực vật: Calcium hypochlorite, Sodium hypochlorite, nước bromine, H₂O₂, HgCl₂, kháng sinh gồm Rifampicin, các polymicin và vancomycin .

  Trong phòng phải có khu vô trùng để chứa môi trưòng dinh dưỡng, nước khử trùng..

4. Phòng chuẩn bị khử trùng mẫu

- Bồn rửa và bàn để mẫu

- Bình chứa nước cất

- Các hoá chất khử trùng mẫu: xà phòng, Acolhol (ethanol) cồn 70%, chất tẩy hay sodium hypochloride NaClO, Ca – hypochloride dạng bột, Clorua thuỷ ngân HgCl_2, Tween 20.

5. Phòng cấy vô trùng

Phòng cấy vô trùng nên là một phòng nhỏ rộng từ 10-15m², có hai lớp cửa để tránh không khí chuyển động từ bên ngoài trực tiếp đưa bụi vào, kín, sàn và tường cần được lát gạch men hoặc sơn để lau chùi và khử trùng thường xuyên. Cửa phòng cấy nên là cửa kính vì trong khi thao tác cấy rất dễ bị phụt đèn cồn do đó cần phải dễ liên lạc với bên ngoài trong lúc cần thiết. Trên tường gắn đèn UV để khử trùng phòng.

- Tủ cấy vô trùng (laminar, clean Bench): tủ cấy tĩnh và tủ cấy thổi khí vô trùng. Trong tủ cấy phải có đèn trắng để dễ làm việc và có đèn UV để khử trùng trước khi làm việc

- Quạt thông gió

- Đèn tử ngoại treo tường 1,2m hoặc treo trần

- Thiết bị lọc khí.

- Giá và bàn để môi trường

- Bộ dụng cụ kẹp cấy, dao mổ, que cấy vòng, kim mũi nhọn, giấy lọc, bình đựng nước cất, đèn cồn (hoặc đèn gas), cốc đựng cồn 90⁰

- Hoá chất xử lý buồng cấy trước khi cấy: fomadehyde (formalin)40%, NH₃ 25%

- Áo choàng, mũ vải, khẩu trang

6. Phòng nuôi

            Tất cả các mẫu cấy đều được nuôi trong điều kiện nhiệt độ ánh sáng, độ ẩm, độ dài chiếu sáng, độ thông khí thích hợp. Phòng nuôi có nhiệt độ 15-300C tùy theo mẫu cấy và mục đích của thí nghiệm. Nhiệt độ phải được phân bố đều trong toàn phòng nuôi, phải có đầy đủ ánh sáng huỳnh quang và có thể điều khiển được cường độ và thời gian chiếu sáng. Phòng nuôi phải được thổi khí đồng nhất và biên độ độ ẩm được điều chỉnh từ 20-98%.

- Các giàn đèn huỳnh quang nhiều ngăn, có độ chiếu sáng ở chỗ để bình nuôi cấy từ 2000-3000 lux.

- Máy điều hòa nhiệt độ

- Máy lắc nằm ngang 100-200 vòng/phút

- Các thiết bị và dụng cụ nuôi cấy tế bào đơn

-Tủ ấm.

6(1) Phòng nuôi sáng: tường nên sơn màu trắng. Các giá đèn được lắp đèn ống để chiếu sáng. Trong phòng cần gắn các máy móc kiểm tra chính xác nhiệt độ, độ ẩm.

6(2) Phòng nuôi tối: để nuôi mô sẹo và các xử lí đặc biệt. Phòng cần tất cả các điều kiện như phòng sáng chỉ khác là không cần lắp đèn chiếu sáng cho cây, cửa sổ cần được che kín bằng vải đen.

7. Phòng sinh hoá

 (phòng này dùng để tiến hành các phân tích sinh hóa, phân tử và di truyền để quan sát và thu nhận số liệu)

- Máy ảnh kỹ thuật số

- Hệ thống đèn chiếu

- Kính hiển vi 2 mắt (độ phóng đại 1000 lần)

- Kính hiển vi soi ngược (độ phóng đại 1000 lần) gắn kèm camera

- Tủ hút, tủ ấm

- Cân các loại

- Máy cắt tiêu bản

- Máy đo pH

- Ly tâm lạnh

- Máy điện di, máy soi AND

- Máy PCR

- Máy sắc kí (HPLC, sắc ký cột, sắc ký lớp mỏng…)

- Quang phổ có dải đo từ 190-1100 nm.

- Tủ lạnh thường, tủ lạnh sâu

- Lò vi sóng

- Pipet tự động các loại

- Máy soi và chụp ảnh gel

-Các tủ đựng hóa chất, tủ hút khí độc.